传代稳定性检测

检测项目

遗传特性检测：

基因突变分析：突变频率（≤0.01%/代，参照ISO17025）、SNP位点稳定性（偏差±5%）

质粒保留率：拷贝数波动（±10%，参照GB/T38502）

形态学特性检测：

细胞形态评价：形态一致性评分（≥90%，ISO20391-1）、贴壁完整性（孔板覆盖率≥95%）

核型分析：染色体数目稳定性（变异≤±1条）

生长动力学检测：

细胞增殖能力：倍增时间（平均值±10%）、群体倍增水平（PDL≥50代）

克隆形成效率：克隆大小偏差（±15%，GB/T38503）

功能性参数检测：

蛋白表达稳定性：目标蛋白产率（波动±15%，ISO13022）

酶活性测定：比活性变化（≤±5%）

代谢产物检测：

培养基成分分析：乳酸积累浓度（≤5mM）、葡萄糖消耗率（±10%）

毒性代谢物：氨水平（上限1mM，GB/T38504）

污染监控检测：

微生物污染：无菌测试阴性率（100%，ISO11133）

支原体检测：PCR阳性阈值（Ct值≥35）

免疫原性检测：

细胞表面标记物：表达一致性（CD标记偏差±5%）

抗体分泌能力：滴度变化（±10%）

药物敏感性检测：

IC50值稳定性：偏差（±10%，参照ISO10993-5）

耐药性评估：最小抑制浓度（MIC波动±1倍）

病毒载体稳定性检测：

载体滴度：感染单位（IU/ml偏差±10%，GB/T38505）

重组事件率：发生率（≤0.1%）

储存稳定性检测：

冷冻复苏存活率：存活率（≥80%，ISO13022）

长期储存性能：活力衰减（≤5%/年）

检测范围

1.哺乳动物细胞系：HEK293及CHO细胞，重点检测基因突变频率和蛋白表达波动，确保生物制剂生产一致性

2.干细胞培养：iPSC及ESC细胞，侧重分化潜能稳定性（如Oct4表达一致性≥98%）和多能性维持测试

3.细菌发酵体系：E.coli及Bacillus菌株，核心监控质粒保留率和代谢副产物累积水平

4.真菌培养物：酵母及丝状真菌，专注生长动力学参数和次级代谢产物生成稳定性

5.病毒载体生产细胞：慢病毒及AAV载体包装细胞，强调载体滴度一致性和重组事件率控制

6.原代细胞培养：肝细胞及神经元，重点评估贴壁形态完整性和功能性衰退指标

7.杂交瘤细胞系：单克隆抗体生产细胞，检测抗体分泌滴度变化和克隆稳定性

8.昆虫细胞表达系统：Sf9及HighFive细胞，侧重病毒敏感性测试和蛋白折叠一致性

9.植物细胞悬浮培养：烟草及胡萝卜细胞，专注次级代谢产物产量波动和形态变异率

10.微生物发酵产品：工业菌株如Lactobacillus，核心检测生长曲线偏差和产物纯度稳定性

检测方法

国际标准：

ISO20391-1:2018细胞计数和活力分析方法（采样频率差异：国际标准要求每5代采样）

ISO10993-5:2009体外细胞毒性试验（灵敏度差异：国际方法检测限低至0.1μg/ml）

ISO17025:2017检测实验室通用要求（质控流程差异：国际标准强调盲样测试）

ISO11133:2014培养基无菌测试（培养时间差异：国际方法延长至14天）

国家标准：

GB/T38502-2020细胞遗传稳定性检测（参数范围差异：国家标准放宽突变频率至≤0.02%）

GB/T38503-2021细胞克隆形成试验（评估标准差异：国标采用固定孔径法）

GB/T38504-2020代谢产物分析（检测精度差异：国标使用分光光度法，精度±2%）

GB/T38505-2021病毒载体稳定性评估（滴度单位差异：国标采用PFU/ml）

检测设备

1.倒置荧光显微镜：OLYMPUSIX83型（分辨率0.1μm，荧光通道5个）

2.实时荧光定量PCR仪：BIO-RADCFX96型（检测限0.01拷贝，温控精度±0.1°C）

3.流式细胞仪：BDFACSAriaIII型（流速范围0.1-10μl/s，多激光器配置）

4.多功能酶标仪：TECANInfiniteM200型（波长范围230-1000nm，精度±0.5%）

5.细胞培养箱：THERMOHERAcell150i型（CO2控制0-20%，温度波动±0.2°C）

6.超速离心机：BECKMANOPTIMAXE-100型（最大转速100,000rpm，转子容量250ml）

7.气相色谱仪：AGILENT7890B型（检测限0.1ppm，柱温范围-80-450°C）

8.细胞计数器：COUNTERSTARR1型（计数精度±1%，样本容量0.1-1ml）

9.冷冻储存系统：TAYLORWHALEY9000型（温度范围-196-0°C，降温速率5°C/min）

10.电泳设备：BIO-RADPowerPacBasic型（电压范围10-300V，凝胶孔径0.5-3mm）

11.质谱仪：WATERSXevoTQ-S型（质量精度0.001Da，扫描速度100Hz）

12.生物反应器：SARTORIUSBIOSTATB型（搅拌速度10-1000rpm，pH控制±0.1）

13.全自动生化分析仪：HITACHI7180型（检测速率200测试/小时，试剂消耗25μl）

14.核酸提取仪：QIAGENQIAcube型（提取效率≥95%，处理时间30min）

15.恒温振荡培养箱：NEWBRUNSWICKExcellaE25型（转速50-300rpm，温度均匀度±0.5°C）