骨髓细胞染色体畸变试验

一、试验背景与目的

骨髓细胞染色体畸变试验是评估化学物质、辐射等因素对生物体遗传物质损伤的经典毒理学方法。

染色体畸变指染色体结构或数目异常，可反映受试物的遗传毒性。

该试验通过检测动物骨髓细胞的染色体变化，判断受试物是否具有致突变性，为药物、化学品的安全性评价及环境毒理研究提供重要依据。

二、试验原理与流程

原理：骨髓细胞具有活跃的分裂能力，受试物进入机体后可作用于分裂期细胞，干扰染色体的正常复制、分离或结构完整性，导致染色体断裂、缺失、易位等畸变。通过制片染色后在显微镜下观察，统计畸变细胞比例。

流程：

动物选择与处理：常用大鼠、小鼠等啮齿类动物，随机分组后经口、腹腔注射等途径给予受试物，设置溶剂对照、阳性对照（如环磷酰胺）。

骨髓采集：在末次染毒后 24-48 小时（细胞分裂高峰期）处死动物，取股骨或胫骨骨髓，制备细胞悬液。

低渗与固定：用低渗溶液（如 KCl）处理细胞，使细胞膨胀、染色体分散；经甲醇 - 冰醋酸固定液固定，稳定细胞形态。

制片与染色：滴片干燥后，用吉姆萨（Giemsa）等染料染色，使染色体显带清晰。

镜检与统计：在油镜下观察至少 100-200 个中期分裂相细胞，记录染色体结构畸变（如断片、裂隙、环状染色体等）和数目畸变（如多倍体、非整倍体）的类型及频率。

三、结果分析与应用

结果判断：若受试物组畸变细胞率显著高于对照组（p<0.05），且存在剂量 - 反应关系，则提示受试物具有染色体损伤作用。

应用场景：广泛用于新药研发的遗传毒性初筛、环境污染物（如重金属、农药）的风险评估，以及辐射防护研究等。

四、注意事项

动物状态：需确保实验动物健康，避免年龄、性别等因素影响结果。

染毒时机：需把握细胞分裂高峰期采样，提高畸变检出率。

对照设置：阳性对照需能稳定诱导畸变，以验证试验体系的有效性。

该试验直观反映染色体损伤，是遗传毒性评价的核心方法之一，但需结合其他试验（如微核试验、Ames 试验）综合判断受试物的毒理效应。